Vanligt använda apoptosanalyser i apoptosforskning

Fråga:

Vad är de vanligaste apoptosanalyserna?

The Protein Man Says:

Apoptosforskning kräver användning av ett brett utbud av apoptosanalyser eftersom själva processen är ganska komplicerad. Dessutom finns det ingen enskild parameter som kan definiera celldöd i alla system, så du bör använda flera metoder när du bedriver din forskning.

Huvudtyper av apoptosanalyser

Det finns fem olika typer av apoptosanalyser som för närvarande används inom apoptosforskning. Detta inkluderar caspasanalyser, DNA-fragmenteringsanalyser, cellpermeabilitetsanalyser och mitokondriella analyser. Dessutom finns det också en typ av test som kan användas för att underlätta analysen av apoptosens signalväg.

Caspase-analyser. Närvaron av caspasenzymer i ett prov är en säker indikator på att komplexa biokemiska händelser i samband med apoptos äger rum. Därför kan caspasanalyser användas för att upptäcka apoptos i cellpopulationer under de tidigaste stadierna. Dessa tester använder rutinmässigt specifika substrat som smälts av caspaserna för att frigöra kolorimetriska eller fluorometriska substrat.

DNA-fragmenteringsanalyser. Apoptos och DNA-klyvning går hand i hand, så du kan bestämma omfattningen av apoptos genom att mäta de DNA-fragment som finns i ditt prov. De flesta forskare använder apoptopisk DNA ladderanalys, ELISA-kvantifiering och TUNEL-analyser (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling) för detta ändamål.

Cellpermeabilitetsanalyser. Apoptos i mellanstadiet kan bestämmas med hjälp av cellpermeabilitetsanalyser. Som du förmodligen vet har friska celler styva plasmamembran medan döda celler har mycket genomsläppliga cellmembran. Med sina mycket komprometterade membran kan fluorescerande färgämnen lätt passera genom apoptopiska celler. När detta sker kommer du att observera ett karakteristiskt fluorescens- eller färgningsmönster som indikerar närvaron av apoptopiska cellpopulationer i ditt prov.

Den ökade cellpermeabiliteten resulterar också i förlust av cytosoliska proteiner från cellen. Laktatdehydrogenas (LDH) är ett lösligt cytosoliskt enzym som frigörs i kulturmediet efter förlust av membranintegritet till följd av antingen apoptos eller nekros. LDH-aktivitet kan därför användas som en indikator på cellmembranets integritet och fungerar som ett allmänt sätt att bedöma cytotoxicitet till följd av kemiska föreningar eller miljögifter. Det finns flera tester för kvantifiering av frigjord LDH.

Mitokondriella tester. Mitokondriella analyser kan hjälpa till att fastställa apoptos i ett tidigt skede eftersom de använder ett katjoniskt färgämne som avger olika fluorescens när det används i friska cellpopulationer och apoptopiska cellpopulationer.

Att veta vilka apoptosanalyser man ska använda och när man ska använda dem kan vara till stor hjälp i forskningen, så det är bäst att du börjar känna till dem utantill.