Sammenligning af svampedræbende virkning af Aloevera gel og Triphala: En in vitro undersøgelse Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A

ORIGINAL ARTIKEL

År : 2017 | Volume : 29 | Issue : 2 | Page : 90-94

Sammenligning af svampedræbende virkning af Aloevera gel og Triphala: En in vitro undersøgelse
Supreet Jain1, Sheetal Mujoo2, Minal Daga3, Salona Kalra4, Ravleen Nagi1, Afshan Laheji5
1 Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, India
2 Department of Oral Medicine and Radiology, College of Dentistry, Jazan University, Saudi-Arabien
3 Department of Conservative Dentistry and Endodontics, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, Indien
4 Department of Oral Medicine and Radiology, Triveni Institute of Dental Sciences Hospital and Research Centre, Bilaspur, Chhattisgarh, Indien
5 Afdeling for oral og maxillofacial patologi, Daswani Dental College, Kota, Rajasthan, India

Korrespondanceadresse:
Supreet Jain
Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Sakri, Bilaspur, Chhattisgarh
India

Supportkilde:
Supreet Jain: Ingen, Interessekonflikter: Ingen

Check

DOI: 10.4103/jiaomr.JIAOMR_167_16

Resumé

Mål: Formålet med den foreliggende undersøgelse var at bestemme og sammenligne de svampedræbende og hæmmende aktiviteter af forskellige koncentrationer af Aloevera gel og Triphala mod oral Candiada albicans. Materialer og metoder: Svampene (C. albicans) blev isoleret fra 10 patienter med pseudomembranøs candidiasis og patienter med tandprotesestomatitis og overført til Sabouraud’s bouillon, som senere blev inkuberet i Sabouraud’s dextrose agar (SDA). Svampehæmmende aktivitet af Aloevera-gelen og Triphala blev testet ved hjælp af diskdiffusionsmetoden, og den mindste hæmmende koncentration blev bestemt ved hjælp af bouillonmikrodilutionsmetoden. Resultater: Middelværdien for hæmningszonen for Aloevera var 3,35 ± 0,59 mm og 1,06 ± 0,41 mm ved henholdsvis 100 % og 50 %. For Triphala var den 4,19 ± 0,57 mm og 1,79 ± 0,43 mm ved henholdsvis 100 % og 50 % (P-værdi < 0,001). Hæmningszonen for 100% Triphala viste en højere værdi end for Aloevera ved samme koncentration (P = 0,004). Lignende resultater blev opnået ved 50% koncentration af Triphala og Aloevera (P = 0,004). Den mindste hæmmende koncentration af Aloevera-gel og Triphala mod C. albicans var henholdsvis 25 % og 12,5 %. Konklusion: Aloevera gel og Triphala viste begge svampedræbende egenskaber ved højere koncentrationer og kan bruges som et lovende supplement til svampedræbende midler.

Nøgleord: Aloevera gel og Triphala, som begge viste svampedræbende egenskaber ved højere koncentrationer og kan bruges som et lovende supplement til svampedræbende midler: Antifungal, kultur, naturlig

Sådan citeres denne artikel:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala: An in vitro study. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017;29:90-4

Sådan citeres denne URL:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala: An in vitro study. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017 ;29:90-4. Available from: https://www.jiaomr.in/text.asp?2017/29/2/90/217911

Introduktion

Candida er en slægt af gærsvampe og er den mest almindelige årsag til svampeinfektion i munden. De fleste af Candida-arterne er harmløse kommensaler eller endosymbionter hos værter, herunder mennesker; men når immunsystemet er svækket, eller når slimhindebarriererne er forstyrret, kan de invadere og forårsage sygdom. Candida albicans er den mest almindeligt isolerede art og er ansvarlig for oral trøske, pseudomembranøs candidiasis.
Den høje pris, bivirkningerne og den øgede resistens over for kommercielt tilgængelige svampemidler har fået forskerne til at udforske naturlige naturlægemidler mod svampeinfektioner.
Traditionelt anvendte lægeplanter er en rig kilde til antimikrobielle stoffer og er let tilgængelige i landområder. De er relativt billigere end moderne medicin. Sekundære metabolitprodukter, der produceres af lægeplanter, er en vigtig kilde til mange farmaceutiske lægemidler.
Aloevera er en kaktuslignende plante, der hører til Liliacea-familien. Aloevera-gel er en slimhindeagtig farveløs gel, der udskilles af de parenkymatøse celler i friske Aloevera-blade. Den indeholder 98-99 % vand og 1-2 % aktive stoffer som aloin, aloe-emodin, aloemannan, flavonoider, aloesin, steroler, aminosyrer og vitaminer. Triphala betyder tre frugter og er en indisk ayurvedisk formulering, der består af Terminali chebula, T. Belerica og Phyllantus embelica i forholdet 1:1:1. Dens fytokemiske bestanddele er tannin, gallinsyre, ellaginsyre, phenol og glykosider. Både Aloevera og Triphala har antibakterielle, antioxidante, svampedræbende, antiinflammatoriske og immunmodulerende egenskaber.,, Virkningerne af Aloevera- og Triphala-ekstrakter på oral Candida-infektion er blevet undersøgt af meget få forskere i Indien. Formålet med undersøgelsen var at bestemme de svampedræbende og hæmmende aktiviteter af forskellige koncentrationer af Aloevera gel og Triphala mod C. albicans.

Materialer og metoder

Undersøgelsen blev udført i afdelingen for mikrobiologi, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur. Der blev indhentet etisk godkendelse fra den institutionelle etiske komité. Der blev indhentet informeret samtykke fra alle patienterne. Candida-svaber blev taget fra patienterne, der led af pseudomembranøs candidiasis ved hjælp af tandprotesestomatitis og overført til Sabouraud’s bouillon . Alle Candida-isolater blev bekræftet ved hjælp af kimrørstest og sporespireringstest. Denne isolerede Candida-prøve blev inkuberet i Sabouraud’s dextrose agar SDA (HIMEDIA laboratories, Mumbai) ved 4 °C.

Figur 1: Candida-vækst i Sabouraud’s bouillon Klik her for at se

Fremstilling af Aloevera-ekstrakt
Den tykke epidermis af friske Aloevera-blade blev fjernet, og den faste slimhindeagtige gel blev opsamlet i en steril beholder . Ti millimeter af gelen blev blandet i 100 ml 1% dimethylsulfoxid (DMSO) og opbevaret ved 4°C. DMSO (≤1 %) har en ubetydelig virkning på væksten af svampe og blev derfor anvendt som opløsningsmiddel.

Figur 2: Ekstraktion af Aloevera gel fra friske blade i steril plade Klik her for at se

Fremstilling af Triphala ekstrakt
Et hundrede gram Triphala churna (Dabur Triphala churna) blev blandet i 100 ml vand for at fremstille en vandig opløsning . Derefter blev denne opløsning kogt i 45 minutter. Senere blev den afkølet og filtreret. Dette filtrat blev anvendt til at kontrollere dets svampedræbende virkning. Svampedræbende egenskab af Aloevera gel og Triphala blev påvist ved hjælp af diskdiffusionsmetoden.

Figur 3: Triphala churna Klik her for at se

Aktivering af Candida albicans
Loopfulde svampesporer blev udstrøet på kartoffel dextrose agar (PDA) plade og inkuberet ved 37°C i 24 timer før testen. Alle plader (n = 10) blev opbevaret ved 4 °C til videre brug.
Skive-diffusionsmetode
Der blev boret 8 mm brønde i hver plade (n = 10 for Candida) med aktiveret C. albicans med et 8 mm bor i agar med frø, hvori der blev hældt 100 %, 50 %, 25 % og 12,5 % Aloevera gelekstrakt. Tilsvarende blev der for Triphala boret 8 mm brønde i forskellige plader (n = 10 for Triphala) med aktiveret C. albicans med en 8 mm boremaskine i agar med frø, hvori der blev hældt 100 %, 50 %, 25 % og 12,5 % Triphala-ekstrakt. Efter normalisering til stuetemperatur blev pladerne inkuberet ved 37°C i 24 timer. Hæmningszonen blev målt og registreret .

Figur 4: (a) Hæmningszone ved 100 % koncentration af Triphala. (b) Hæmningszone ved 50% koncentration af Triphala. (c) Hæmningszone ved 100 % koncentration af Aloevera. (d) Hæmningszone ved 50% koncentration af Aloevera Klik her for at se

Minimale hæmmende koncentration
Minimale hæmmende koncentration (MIC) blev foretaget ved hjælp af mikrobrothfortyndingsmetoden. Den højeste fortynding, der ikke gav nogen enkelt svampekoloni, blev taget som MIC. Aloevera-ekstrakter blev blandet med 1 % DMSO for at opnå forskellige koncentrationer af stamproduktet, dvs. 100 %, 50 %, 25 %, 12,5 % og 6,25 %. På samme måde blev der opnået forskellige koncentrationer af Triphala ved at blande ekstrakt med destilleret vand. Lige store mængder af de forskellige koncentrationer af hvert ekstrakt blev blandet i mikrorør (Sabouraud dextrose bouillon) for at opnå 0,5 ml af opløsningen. Rørene blev inkuberet ved 37 °C i 24 timer. Senere blev testfortyndingen subkultiveret på SDA og inkuberet i 24 timer for at kontrollere for svampevækst .

Figur 5: Mindste hæmmende koncentration for Triphala og Aloevera Klik her for at se

Statistisk analyse
Dataene blev samlet i MS Office Excel. Statistisk analyse blev foretaget ved hjælp af softwarepakken SPSS version 21 (SPSS Statistics for Windows, version 21.0. Chicago: SPSS Inc.). Variansanalyse (ANOVA) test blev udført til intra- og intergruppesammenligninger. Post hoc-test (Tukey HSD) blev også udført for at sammenligne forskellige koncentrationer af Aloevera, Triphala og begge. Resultaterne blev målt som gennemsnit ± SD. P-værdi mindre end <0,05 blev betragtet som statistisk signifikant og <0,001 som meget signifikant.

Resultat

De indsamlede Candida-prøver blev analyseret ved Gram-farvning, som viste tilstedeværelsen af klynger af pseudohyphaer, der tyder på C. albicans-arter. Middelværdien for hæmningszonen for Aloevera var 3,35 ± 0,59 mm og 1,06 ± 0,41 mm ved henholdsvis 100 % og 50 %. For Triphala var den 4,19 ± 0,57 mm og 1,79 ± 0,43 mm ved henholdsvis 100 % og 50 % . Både Triphala og Aloevera gel viste svampedræbende egenskaber ved højere koncentrationer (100 % og 50 % koncentration, P-værdi < 0,001).

Tabel 1: Middelværdi af hæmningszone for Aloevera og Triphala ved forskellige koncentrationer Klik her for at se

Der blev observeret en meget signifikant forskel mellem 100 % og 50 % Aloevera (P< 0,001, t = 19,17). Lignende resultater blev observeret for 100% og 50% Triphala (P< 0,001, t = 31,58) . Da ANOVA blev udført, var frihedsgraden mellem Aloevera og Triphala 3 og inden for grupperne (100% v/s 50%) var den 36 . Ved post hoc test viste hæmningszonen for 100% Triphala en højere værdi end Aloevera ved samme koncentration (P = 0,004). Lignende resultater blev opnået ved 50% koncentration af Triphala og Aloevera (P = 0,000) . Ved lavere koncentrationer (25 % og 12,5 %) var der ingen effekt mod Candida. MIC for Aloevera-gel og Triphala mod C. albicans var henholdsvis 25 % og 12,5 %.

Tabel 2: Student’s t-test for at vise sammenligning inden for gruppen Klik her for at se

Tabel 3: ANOVA-test, der viser frihedsgrader mellem grupperne og inden for gruppen Klik her for at se

Tabel 4: Post hoc Test (Tukey HSD) viser sammenligning inden for grupperne Klik her for at se

Diskussion

Den stigende forekomst af multiresistente (MDR) bakterier og svampe og de høje omkostninger ved farmaceutiske lægemidler har gjort det nødvendigt at udvikle alternative lægemidler fra naturlige og andre kilder. Medicinalplanter, som siden oldtiden er blevet anvendt i Ayurveda, kunne være et af disse alternativer, da de er billige, sikre og effektive mod mange mikrober. Mange forskere har kontrolleret den antibakterielle virkning af Aloevera og Triphala.,,, Meget få undersøgelser er blevet gennemført for at kontrollere den svampedræbende virkning af disse planter mod oral candidainfektion.,,,,,, Den foreliggende undersøgelse blev gennemført for at bestemme den svampedræbende og hæmmende virkning af forskellige koncentrationer af Aloevera gel og Triphala mod C. albicans. I den foreliggende undersøgelse viste både Triphala og Aloevera anticandidale egenskaber ved 100 % og 50 % koncentrationer. Der blev ikke set nogen signifikante ændringer ved lavere koncentrationer (25 % og 12,5 %).
Sheta et al. brugte 0,5 % DMSO og destilleret vand som opløsningsmiddel og blandede Triphala (suspension) for at få en slutkoncentration på 100 mg/ml. De fandt, at hæmningszonen for Triphala mod Candida var 12 mm, når vand blev brugt som opløsningsmiddel og 20 mm, når DMSO blev brugt som opløsningsmiddel. Forfatterne har også kontrolleret svampedræbende egenskaber for DMSO og fandt, at det ikke har nogen svampedræbende virkning. De kogte ikke vandsuspensionen, hvilket kan være årsagen til bedre resultater end vores undersøgelse. Randhawa foreslog, at DMSO øger cellens permeabilitet ved at binde sig til cellemembranen og dermed forårsager synergistisk virkning med anticandidale lægemidler. I det foreliggende tilfælde blev der anvendt vand som opløsningsmiddel til Triphala. El-Mekkawey et al. fandt, at T. chebula kan hæmme Candida-arter (herunder clotrimazol-resistente C. albicans). Malhotra et al. fandt i deresin vitro-undersøgelse, at kolonidannende enheder (CFU’er) af C. albicans faldt til nul efter 10 min ved brug af 6 % Triphala mundskyl.
Khaing fandt, at ethanolisk ekstrakt af Aloevera ikke har nogen antikandidel virkning. En lignende undersøgelse af Kaur et al. viste, at Aloevera var effektiv mod C. albicans. De foreslog, at et positivt resultat i deres undersøgelse kunne skyldes en ændring i proceduren for gelekstraktion, dvs. at de ekstraherede gelen ved stuetemperatur, hvorimod en tidligere undersøgelse ekstraherede gelen ved 90 °C. Derfor kan den aktive komponent være gået tabt i det ethanoliske ekstrakt, hvis ekstraktionen blev foretaget ved en højere temperatur.

En undersøgelse af Stanley et al. fandt, at hæmningszonen for Aloevera mod C. albicans var 4 mm og MIC var 50 %, hvilket svarede til den foreliggende undersøgelse. Shireen et al. fandt, at den antifungale egenskab af Aloevera er dosisafhængig. De tog Aloevera-saft (1000, 500, 250, 250, 100 μg) fra friske blade og blandede det med 10 ml ethanol. Hæmningszonen var 14 mm mod C. albicans ved 1000 μg koncentration, hvilket var sammenligneligt med amphotericin B. Chainani et al. brugte ethanolisk ekstrakt af Triphala og fandt, at det viste anticandidal effekt ved koncentration 5% og derover. Triphala viste bedre resultater sammenlignet med Aloevera, med større hæmningszone i både 100 % og 50 % koncentration. Desuden hæmmer Triphala Candida-vækst ved lavere koncentration (12,5%) sammenlignet med Aloevera (50%).
Den antimikrobielle virkning af Aloevera tilskrives den naturlige komponent kaldet anthraquinoner (emodin, aloetic acid, aloin, anthracene, anthranol, barbaloin, chrysophanic acid, ethereal oil, ester af cinnamic acid, isobarbaloin, og resistannol)., Det rensede aloeprotein på 14 kDa fra Aloeveras bladgel udviste en potent svampedræbende aktivitet mod C. albicans.Den svampedræbende virkning af Triphala skyldes dens to komponenter.
Vi har fundet, at både Triphala og Aloevera har vist en svampedræbende aktivitet mod C. albicans. Imidlertid er virkningsmekanismen af disse plantestoffer på mikrober endnu ikke forstået. Desuden er der behov for flere undersøgelser af forskellige svampebelastninger og forskellige koncentrationer af både Triphala og Aloevera for at kontrollere deres potens mod forskellige Candida-arter.

Konklusion

Stigning i svampepatogener, begrænsede terapeutiske muligheder, bivirkninger af terapeutisk medicin og fremkomsten af MDR udgør tilsammen en byrde for patienter med svækket immunitet. C. albicans er den mest almindelige opportunistiske infektion i mundhulen, som ofte isoleres fra vævsprøver af berørte patienter. Traditionel medicin har anvendt planteprodukter siden tidernes morgen. På grund af deres lette tilgængelighed og mindre giftige virkning er der blevet gjort en indsats for at udvikle terapeutiske muligheder ved hjælp af molekyler fra plantekilder. Denne undersøgelse er også en lignende indsats for at kontrollere de antifungale virkninger af Triphala og Aloevera. I denne undersøgelse blev Aloevera og Triphala fundet at vise svampedræbende aktivitet.
Begrænsninger
Denne undersøgelse blev udført in vitro og involverede en lille stikprøvestørrelse. I fremtiden bør der udføres flere forsøg på større populationer (in vivo) for at bevise den svampedræbende virkning af Aloevera og Triphala mod C. albicans for at karakterisere virkningsmekanismen med henblik på yderligere oversættelse til klinisk brug og overvindelse af udfordringerne ved svampeterapeutiske midler.

Finansiel støtte og sponsorering
Nul.
Interessekonflikter
Der er ingen interessekonflikter.

	Rathod M, Das N, Dhale D. Antifungal aktivitet af to medicinalplanter mod svampen Candida albicans. Int J Pharma Bio Science 2015;6;6:701-6.
	Martins C, Silva D, Neres A, Magalha T, Watanabe G, Modolo L, et al. Curcumin as a promising antifungal of clinical interest. J Antimicrob Chemother 2009;63:337-9.
	Fani M, Kohanteb J. Inhibitory activity of Aloe vera gel on some clinically isolated cariogenic and periodontopathic bacteria. J Oral Sci 2012;54;54:15-21.
	Vogler BK, Ernst E. Aloe vera: En systematisk gennemgang af dens kliniske effektivitet. Br J Gen Pract 1994;9:823-8.
	Ahmad I, Mehmood Z, Mohammad F. Screening of some Indian medicinal plants for their antimicrobial properties. J Ethnopharmacol 1998;62;62:183-93.
	Wadhwan R, Sharma S, Solanki G, Solanki R. Role of triphala in dentistry: En gennemgang. Int J Preclinical Pharmaceutical Res 2014;2:95-9.
	Kammoun M, Miladi S, Ali YB, Damak M, Gargouri Y, Bezzine S.In vitro undersøgelse af PLA2-hæmning og antioxidant-aktiviteter af Aloe vera-bladskindsekstrakter. Lipids Health Dis 2011;10:30.
	Shetty PJ, Hegde V, Gomes L. Anticandidal effekt af tandproteserensningstablet, Triphala, Aloe vera og Cashew-blad på komplette tandproteser hos institutionaliserede ældre mennesker. J Ayurveda Integr Med 2014;5:11-4.
	Randhawa MA, Aljabre SHM. Dimethylsulfoxid (DMSO) har en additiv virkning og ændrer minimale hæmmende koncentrationer af svampedræbende lægemidler. J Rawalpindi Med College 2007;11:54-60.
	Harringtom A, McCourtney K, Nowowiejski D, Limaye A. Differentiation of Candida albicans yeast directly from blood cultures by gram stain morphology. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2007;26:325-9.
	El-Mekkawey M, Merelhy M. Inhibitoriske virkninger af egyptisk folkemedicin på human immundefekt virus (HIV) omvendt transkriptase. Chem Pharm Bull 1995;43:641-8.
	Sheta MM, Kikani KM, Kavithia P, Thakkar J, Rangnani T. Undersøgelse af antimikrobiel aktivitet af Triphala og dens individuelle komponenter. Int J Herb Med 2016;4:41-3.
	Malhotra A, Malhotra I, Solanki R, Khangwal M, Kumar D. Evaluation of antibacterial and antifungal properties of herbbal mouthwash- A prospective study. Int J Enhanced Res Med Dent Care 2015;2:33-7.
	Khaing TA. Evaluering af de svampedræbende og antioxidante aktiviteter af bladekstrakt af Aloe vera (Aloe barbadensis Miller). World Acad Sci Engineer Tech 2011;5:3-23.
	Kaur H, Goyal RR, Bhattacharya A, Gupta R, Lal NK, Arora B, et al. Antifungal activity of phyto-extracts of Piper Longum, Aloevera, and Withania somnifera against human fungal opportunistic pathogen Candida albicans. DU J Undergrad Res Innov 2015;1:107-15.
	Stanley MC, Ifeanyi OE, Eziokwu OG. Antimikrobielle virkninger af Aloevera på nogle humane patogener. Int J Curr Microbiol App Sci 2014;3:1022-8.
	Shireen F, Manipal S, Prabhu D. Antifungal activity of aloevera:In vitro study. SRM J Res Dent Sci 2015;6:92-5.
	Chainani S, Siddana S, Reddy CV, Thippeswamy M, Maurya M, Rudraswami S. Antimikrobiel aktivitet af Triphala på Lactobacilli og candida albicans: En in vitro undersøgelse. J Orofac Sci 2015;7:104-7.
	Pandey R, Mishra A. Antibacterial activities of crude extract of Aloe barbedensis to clinically isolated bacterial pathogens. Appl Biochem Biotechnol 2010;160;160:1356-61.

Figures

, , , , ,