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AltaBioscience Aminosäure-Analyseservice bietet zwei Haupttypen von Analysen, „total“ und „free“, für eine Vielzahl von Proben an.

Analysetypen: für Aminosäuren, die in Proteinen gebunden sind oder Aminosäuren, die als freie Einheiten vorliegen.

Die Aminosäure-Analyse bestimmt die Aminosäuren, die in Proteinen gebunden sind, sowie die Aminosäuren, die als einzelne ungebundene Einheiten vorliegen können.

Die Analyse der freien Aminosäuren bestimmt die Menge jeder einzelnen ungebundenen, d.h. nicht in einem Protein gebundenen Aminosäure.

Bei einigen Anwendungen können beide Analysen erforderlich sein, um den Unterschied zwischen gebundenen und ungebundenen Aminosäuren zu bestimmen.

Gesamtaminosäureanalyse

Wenn die Aminosäurezusammensetzung eines Proteins oder Peptids von Interesse ist oder wenn die Gesamtproteinkonzentration einer Probe benötigt wird, ist dies die Methode der Wahl. Die in der Probe enthaltenen Proteine und/oder Peptide werden durch saure Hydrolyse in ihre einzelnen Aminosäuren aufgespalten, so dass der Extrakt eine Summe aus Aminosäuren ist, die in Lösung frei waren, und solchen, die vor der Hydrolyse in Proteine eingebaut wurden. Die Aminosäuren im Hydrolysat werden vor dem Nachweis mit einem Natriumcitratpuffersystem getrennt.

Mit dieser Methode werden 18 der 20 Standardaminosäuren gemessen.

Abbildung 1. Beispielchromatogramm eines Aminosäurestandards, aufgetrennt mit dem Proteinhydrolysat (Natrium)-System

Tryptophan und Cystin gehen in der Regel bei der Säurehydrolyse verloren, jedoch können für diese Aminosäuren Schätzwerte angegeben werden, wenn die Sequenz bekannt ist. Für die spezifische Quantifizierung von Tryptophan oder Cystin stehen separate zusätzliche Testmethoden zur Verfügung.

Analyse freier Aminosäuren

Für die Analyse von Proben wie physiologischen Flüssigkeiten, einschließlich Serum oder Zellwachstumsmedien, sind die in Proteine oder Peptide eingebauten Aminosäuren nicht von Interesse, und es ist die Konzentration der einzelnen ungebundenen Aminosäuren, die benötigt wird.Daher werden das Protein und störende Verbindungen entfernt, so dass die Aminosäuren frei in Lösung bleiben. Die freien Aminosäuren werden dann vor dem Nachweis mit einem Lithiumcitrat-Puffersystem getrennt. Diese hochauflösende Methode quantifiziert bis zu 40 Komponenten, einschließlich vieler nicht standardisierter Aminosäuren.

Abbildung 2. Beispielchromatogramm eines Aminosäurestandards, der mit dem physiologischen (Lithium-)System aufgetrennt wurde

Für weitere Informationen über den von uns angebotenen Aminosäure-Analyseservice kontaktieren Sie uns bitte.

E: [email protected] T: +44 (0)1527 584495

Autor: Sarah Hawker, Senior Analyst