Regular ArticleAngiotensina II modula ANP-R2/ANP-C Receptor-mediated Inhibition of Adenylyl Cyclase in Vascular Smooth Muscle Cells: Role of Protein Kinase C☆

Nei presenti studi, abbiamo indagato la modulazione del recettore del peptide natriuretico atriale (ANP) del sottotipo R2 (ANP-R2/ANP-C) accoppiato al sistema di trasduzione del segnale adenililciclasi/cAMP dall’angiotensina II (angII). C-ANF4-23 e AngII hanno inibito l’attività dell’adenilciclasi in modo concentrazione-dipendente nelle cellule muscolari lisce vascolari (VSmc A-10). Le inibizioni massime osservate erano circa il 40 e il 30%, rispettivamente, con un Kiof apparente di circa 1 e 10 nm. Il pretrattamento delle cellule con AngII ha portato all’attenuazione di entrambe le inibizioni mediate da C-ANF4-23 e AngII dell’adenilciclasi, senza alterare il legame di -ANF. Anche i livelli delle proteine Giα-2 e Giα-3, determinati dall’immunoblotting, sono stati aumentati dal trattamento con AngII. Inoltre, il trattamento con AngII ha stimolato la fosforilazione di Giα2 ma non di Giα3 o del recettore ANP-C, come rivelato dall’immunoprecipitazione delle proteine usando anticorpi specifici dopo aver prelaccato le cellule con ortofosfato. La staurosporina e la cheleritrina, inibitori della protein chinasi C (PKC) a 1 e 100 nm, rispettivamente, hanno impedito la desensibilizzazione mediata dall’AngII dell’adenil ciclasi sensibile al C-ANF4-23. Inoltre, la fosforilazione mediata dall’AngII della proteina Giα2 è stata parzialmente inibita di circa il 35% dal trattamento con staurosporina. Questi risultati suggeriscono che l’attenuazione dell’inibizione mediata da C-ANF4-23 dell’attività dell’adenilciclasi da parte dell’AngII non può essere attribuita alla downregulation dei recettori o alla diminuzione dei livelli delle proteine G, e può coinvolgere meccanismi dipendenti dalla PKC.