Albino Rabbit

Primary Irritation-Skin

Zwierzętami, które były szeroko stosowane do wykrywania właściwości drażniących substancji chemicznych są królik albinos, świnka morska albinos i biała mysz. W każdym przypadku, gdy substancja chemiczna jest stosowana przez wielokrotne nakładanie skórne, celem badania jest wykrycie zarówno skutków miejscowych, jak i ogólnoustrojowych. W przypadku gdy związki są w znacznym stopniu wchłaniane przez skórę, może zostać określona wartość LD50. Jeżeli wykorzystuje się króliki, czas trwania badań może wahać się od minimum 3 dni, obejmując jednorazowe zastosowanie środka, do nawet 2 lat. W każdym przypadku, gdy badanie jest typu przedłużonego, zwierzęta są obserwowane w sposób podobny do ogólnych badań przedłużonych opisanych wcześniej; to znaczy, zwierzęta są poddawane badaniom hematologicznym, chemii klinicznej i moczu. Gdy mają być ocenione skutki rakotwórcze, badania skórne są przedłużone na okres 2 lat, podczas których środek jest malowany na skórze co najmniej dwa razy w tygodniu przez czas trwania badania.

Ostre badanie skórne jest zazwyczaj badaniem 3-dniowym. Przeprowadza się go na ograniczonej liczbie królików albinosów, które zostały podzielone na dwie równe grupy. Obszar na grzbiecie każdego zwierzęcia rozciągający się od podstawy szyi do ćwiartek tylnych jest golony lub depilowany. W jednej grupie obszar około 2 cal.2 nagiej skóry jest ścierany poprzez wykonywanie niewielkich nacięć przez powierzchniową warstwę komórek; oznacza to, że nacięcia nie są wystarczająco głębokie, aby naruszyć skórę właściwą lub wywołać krwawienie. Jeżeli materiałem badanym jest ciecz, 0,5 ml lub mniej materiału umieszcza się pod podkładką z gazy o wymiarach 1 × 1 cala, którą mocuje się w miejscu nad ogolonym obszarem skóry zarówno zwierząt poddanych, jak i niepoddanych ścieraniu. Jeżeli środek jest ciałem stałym, rozpuszcza się go w odpowiednim rozpuszczalniku, takim jak olej roślinny lub woda, a 0,5 g substancji wprowadza się pod gazik. W każdym przypadku, gdy stosowany jest rozpuszczalnik, do badania włączana jest grupa kontrolna zwierząt narażonych wyłącznie na działanie rozpuszczalnika. Zwierzęta są następnie na ogół unieruchamiane w przytrzymywaczach, a cały tułów każdego zwierzęcia owijany jest niewchłanialnym spoiwem na następne 24 godziny. Po 24-godzinnym przedziale czasowym usuwa się spoiwo i podkładkę, a obszar ekspozycji jest oceniany i ponownie oceniany 48 godzin później.

Ocena efektów skórnych obejmuje wykorzystanie systemu punktacji dla stopnia zaczerwienienia i stopnia obrzęku w miejscu zastosowania podkładki z gazy. Stosowany system punktacji jest zazwyczaj systemem, który został opublikowany w Rejestrze Federalnym w sekcji 191.11 Federalnej Ustawy o Substancjach Niebezpiecznych Stanów Zjednoczonych. Punktacja obejmuje względne przypisanie oddzielnych liczb dla stopnia rumienia i stopnia tworzenia się obrzęku w następujący sposób: brak rumienia, 0; lekki, ledwie wyczuwalny rumień, 1; dobrze odgraniczony rumień, 2; umiarkowany do ciężkiego rumień, 3; oraz ciężki, buraczkowo czerwony, rumień z obrażeniami na głębokości, 4; brak obrzęku, 0; lekki, ledwie wyczuwalny obrzęk z uniesionymi brzegami, 2; umiarkowany obrzęk z powierzchnią uniesioną na około 1 mm, 3; ciężki obrzęk z powierzchnią uniesioną bardziej niż poprzednio i wykraczającą poza obszar ekspozycji, 4. Wyniki uzyskane dla rumienia i obrzęku w każdym okresie punktacji oraz zarówno dla skóry otartej, jak i nieuszkodzonej są zestawiane i obliczana jest średnia dla każdej grupy i dla każdego rodzaju efektu. Następnie wszystkie osiem średnich wartości sumuje się i dzieli przez 4, ponieważ istnieją cztery średnie wartości dla każdego działania (rumień i obrzęk), uzyskując w ten sposób ostateczną liczbę liczbową, która stanowi wynik pierwotnego działania drażniącego. W przypadku gdy oprócz toksyczności miejscowej ma być określona toksyczność ogólnoustrojowa, zwierzęta poddaje się działaniu preparatu jednorazowo, jak wskazano powyżej, z tym że obszar narażenia na działanie preparatu przemywa się po usunięciu podkładki z gazy, a zwierzęta obserwuje się przez kolejne 14 dni pod kątem dowodów na występowanie skutków miejscowych i ogólnoustrojowych.

W przedłużonych badaniach wielokrotnego podawania preparatu, trwających 3 miesiące, młode króliki albinosy obu płci dzieli się losowo na trzy grupy po trzy do sześciu zwierząt w każdej grupie plus taka sama liczba zwierząt kontrolnych. Obszar ekspozycji na skórze co najmniej dwóch zwierząt w każdej grupie jest ścierany. Materiał badany jest nakładany bezpośrednio na skórę przez 5 dni w tygodniu, w sumie 60 aplikacji. Cały tułów każdego zwierzęcia jest owinięty jak w poprzednim badaniu, a owinięcie jest zabezpieczone taśmą klejącą. Zwierzęta mają założone obroże, aby zapobiec połknięciu badanego materiału. Ocena punktowa obserwowanych skutków miejscowych jest wykonywana w odstępach czasu podczas badania, a zwierzęta są obserwowane pod kątem skutków ogólnoustrojowych. Na koniec sekwencji ekspozycji zwierzęta są zabijane i przeprowadzana jest pełna nekropsja. Oceniane są wycinki histologiczne obszaru narażenia skóry, jak również wszystkich nieprawidłowych tkanek.

Badanie możliwych skutków rakotwórczych z powtarzanego podawania miejscowego środków chemicznych obejmuje badania różniące się czasem trwania od 3 miesięcy do 2 lat. Zwierzętami powszechnie wykorzystywanymi są białe myszy, a badanie obejmuje zarówno pozytywne, jak i negatywne grupy kontrolne zwierząt plus co najmniej dwie grupy badane, którym przypisuje się wysokie i niskie stężenia dozowania środka. Liczba zwierząt w każdej grupie wynosi od 25 do 50 samców plus równa liczba samic, z których wszystkie są trzymane w indywidualnych pomieszczeniach. Skóra każdego zwierzęcia jest golona na grzbiecie u podstawy szyi i między łopatkami. Środek jest malowany lub upuszczany z pipety na odsłoniętą skórę. Przy każdym zastosowaniu objętość nakładanego materiału wynosi 0,1 ml, a zwierzęta są poddawane działaniu środka dwa razy w tygodniu przez okres trwania doświadczenia. Zwierzęta, które przeżyły doświadczenie, jak również te, które zachorowały podczas doświadczenia, są poddawane nekropii. Badanie histopatologiczne jest przeprowadzane na wszystkich tkankach, jak opisano w konwencjonalnych badaniach toksyczności przewlekłej. Szczególna uwaga jest skierowana na ocenę zwierząt w trakcie trwania badania pod kątem pojawienia się i charakteru guzów skórnych u zwierząt. Badania te są powszechnie modyfikowane w celu włączenia procedur mających na celu wykrycie, czy badana substancja chemiczna działa poprzez inicjowanie lub wspieranie powstawania guzów.

.