Albino Rabbit
Primary Irritation-Skin
Os animais que têm sido amplamente utilizados para a detecção de propriedades irritantes de produtos químicos são o coelho albino, o porco-da-índia albino e o rato branco. Sempre que um produto químico é aplicado por aplicação dérmica repetida, o objetivo do teste é detectar tanto os efeitos tópicos como sistêmicos. Quando os compostos são absorvidos significativamente da pele, o LD50 pode ser determinado. Quando são utilizados coelhos a duração dos testes pode variar desde um mínimo de 3 dias, envolvendo a aplicação do agente em uma ocasião, até um máximo de 2 anos. Sempre que o estudo for do tipo prolongado, os animais são seguidos de forma semelhante aos estudos prolongados gerais descritos anteriormente, ou seja, os animais são submetidos a testes hematológicos, químicos clínicos e de urina. Quando os efeitos cancerígenos devem ser avaliados, os testes cutâneos são prolongados por um período de 2 anos, durante o qual o agente é pintado na pele pelo menos duas vezes por semana, durante a duração do teste.
O teste dérmico agudo é geralmente um teste de 3 dias. É realizado em um número limitado de coelhos albinos que foram divididos em dois grupos iguais. A área sobre o dorso de cada animal que se estende desde a base do pescoço até os quartos traseiros é raspada ou depilada. Em um grupo uma área de aproximadamente 2 em.2 da pele nua é raspada fazendo pequenas incisões através da camada superficial das células; isto é, as incisões não são suficientemente profundas para perturbar a derma ou produzir sangramento. Se o material de teste for um líquido, 0,5 ml ou menos do material é colocado debaixo de uma almofada de gaze de 1 × 1 pol. que é fixada no lugar sobre a área raspada da pele dos animais, tanto os esfolados como os não esfolados. Se o agente for sólido, é dissolvido em um solvente adequado, como óleo vegetal ou água, e 0,5 g da substância é introduzido sob o bloco de gaze. Sempre que for utilizado um solvente, o teste inclui um grupo de controlo de animais expostos apenas ao solvente. Os animais são então geralmente imobilizados em estoques de contenção e o tronco inteiro de cada animal é envolvido em um aglutinante não absorvente durante as 24 horas seguintes. Após o intervalo de 24 horas o aglutinante e a almofada são removidos, e a área de exposição é avaliada e reavaliada 48 horas depois.
Avaliação dos efeitos na pele envolve o uso de um sistema de pontuação para o grau de vermelhidão e o grau de edema no local de aplicação da almofada de gaze. O sistema de pontuação utilizado é geralmente o que foi publicado no Federal Register na Seção 191.11 do Federal Hazardous Substances Act of the United States. A pontuação envolve a atribuição relativa de números separados para o grau de eritema e o grau de formação do edema, como se segue: sem eritema, 0; eritema leve, pouco perceptível, 1; eritema bem definido, 2; eritema moderado a grave, 3; e grave, vermelho de beterraba, eritema com lesões em profundidade, 4; sem edema, 0; edema leve, pouco perceptível com bordas elevadas, 2; edema moderado com a superfície levantada aproximadamente 1 mm, 3; edema grave com a área levantada mais do que antes e que se estende além da área de exposição, 4. As pontuações obtidas tanto para o eritema como para o edema em cada período de pontuação e tanto para a pele abrupta e intacta são listadas e a média para cada grupo e para cada tipo de efeito é calculada. Todos os oito valores médios são então somados e divididos por 4 uma vez que existem quatro valores médios para cada efeito (eritema e edema), dando assim um valor numérico final que é a pontuação de irritação primária. Quando a toxicidade sistêmica deve ser determinada além da toxicidade local, os animais são tratados em uma ocasião como indicado acima, exceto que a área de exposição é lavada após a remoção da gaze e os animais são seguidos durante os 14 dias subseqüentes para evidência de efeitos locais e sistêmicos.
Em estudos de administração prolongada e repetida por períodos de 3 meses de duração, os coelhos albinos jovens de ambos os sexos são divididos aleatoriamente em três grupos de três a seis animais em cada grupo mais um número igual de animais de controle. A área de exposição na pele de pelo menos dois animais em cada grupo é reduzida. O material de teste é aplicado diretamente na pele 5 dias/semana para um total de 60 aplicações. O tronco inteiro de cada animal é envolto como no teste anterior e o envoltório é fixado com fita adesiva. Colares são colocados sobre os animais para evitar a ingestão do material de teste. A pontuação dos efeitos tópicos observados é feita em intervalos durante o teste e os animais são observados para efeitos sistêmicos. No final da sequência de exposição, os animais são mortos e são realizadas necropsias completas. São avaliados cortes histológicos da área de exposição cutânea, bem como de todos os tecidos anormais.
A investigação de possíveis efeitos carcinogênicos da administração tópica repetida de agentes químicos envolve estudos com duração variando de 3 meses a 2 anos de duração. Os animais comumente usados são ratos brancos, e o teste inclui tanto grupos de controle positivo como negativo de animais, mais um mínimo de dois grupos de teste que são atribuídos a altas e baixas concentrações de dose do agente. O número de animais em cada grupo é de 25 a 50 machos mais um número igual de fêmeas, todas elas alojadas individualmente. A pele de cada animal é raspada na parte posterior da base do pescoço e entre as escápulas. O agente é pintado ou deixado cair de uma pipeta sobre a pele exposta. Em cada aplicação o volume de material aplicado é de 0,1 ml, e os animais são tratados duas vezes por semana durante o período de duração da experiência. Os animais que sobrevivem ao experimento assim como os que adoecem durante o experimento são necropsiados. O exame histopatológico é feito de todos os tecidos, como descrito nos testes convencionais de toxicidade crônica. Atenção especial é dirigida à avaliação dos animais durante o curso do estudo para a aparência e natureza dos tumores de pele nos animais. Estes testes são normalmente modificados para incluir procedimentos para detectar se a substância química a ser testada age iniciando ou promovendo a ocorrência de tumores.