Albino kanin

Primær irritation – hud

Den albino kanin, albino marsvinet og den hvide mus er de dyr, der i vid udstrækning er blevet anvendt til påvisning af kemiske stoffers irriterende egenskaber. Når et kemikalie anvendes ved gentagen dermal påføring, er formålet med testen at påvise både topiske og systemiske virkninger. Når stofferne absorberes i betydelig grad fra huden, kan LD50 bestemmes. Når der anvendes kaniner, kan forsøgets varighed variere fra mindst 3 dage, hvor stoffet påføres én gang, til helt op til 2 år. Når undersøgelsen er af den langvarige type, følges dyrene på samme måde som de generelle langvarige undersøgelser, der er beskrevet tidligere, dvs. at dyrene underkastes hæmatologiske, klinisk-kemiske og urinprøver. Når kræftfremkaldende virkninger skal vurderes, forlænges hudforsøgene i en periode på 2 år, hvor midlet males på huden mindst to gange ugentligt i hele forsøgsperioden.

Den akutte dermale test er normalt en 3-dages test. Den udføres på et begrænset antal albino-kaniner, som er blevet inddelt i to lige store grupper. Området på ryggen af hvert dyr, der strækker sig fra nakkefoden til bagkroppen, barberes eller epileres. I den ene gruppe skrabes et område på ca. 2 in.2 af den nøgne hud ved at foretage mindre snit gennem overfladelaget af celler; det vil sige, at snittene ikke er tilstrækkeligt dybe til at forstyrre dermaen eller give blødning. Hvis testmaterialet er en væske, anbringes 0,5 ml eller mindre af materialet under en 1 × 1 tommer stor gazepude, som fastgøres på plads over det barberede hudområde på både de afrevne og de ikke-afrevne dyr. Hvis stoffet er et fast stof, opløses det i et egnet opløsningsmiddel, f.eks. vegetabilsk olie eller vand, og 0,5 g af stoffet anbringes under gazeindlægget. Når der anvendes et opløsningsmiddel, indgår en kontrolgruppe af dyr, der kun udsættes for opløsningsmidlet, i forsøget. Dyrene immobiliseres derefter som regel i fastholdelsesstativer, og hele deres bagkrop pakkes ind i et ikke-absorberende bindemiddel i de følgende 24 timer. Efter 24 timer fjernes bindemidlet og puden, og det eksponerede område vurderes og revurderes 48 timer senere.

Evalueringen af hudeffekterne omfatter anvendelse af et pointsystem for graden af rødme og graden af ødem på det sted, hvor gazepuden er påført. Det anvendte scoringssystem er normalt det, der er offentliggjort i Federal Register i afsnit 191.11 i Federal Hazardous Substances Act of the United States. Ved scoringen tildeles separate tal for graden af erytem og graden af ødemdannelse på følgende måde: ingen erytem, 0; let, knap mærkbart erytem, 1; veldefineret erytem, 2; moderat til alvorligt erytem, 3; og alvorligt, rødbedefarvet erytem med skader i dybden, 4; ingen ødem, 0; let, knap mærkbart ødem med hævede kanter, 2; moderat ødem med overfladen hævet ca. 1 mm, 3; alvorligt ødem med området hævet mere end før og strækkende sig ud over eksponeringsområdet, 4. De opnåede scorer for både erytem og ødem i hver scoringsperiode og for både den afskrabede og intakte hud er anført, og gennemsnittet for hver gruppe og for hver type virkning er beregnet. Alle otte middelværdier lægges derefter sammen og divideres med 4, da der er fire middelværdier for hver virkning (erytem og ødem), hvorved man får et endeligt tal, som er den primære irritationsscore. Når systemisk toksicitet skal bestemmes ud over lokal toksicitet, behandles dyrene ved én lejlighed som angivet ovenfor, bortset fra at eksponeringsområdet vaskes, efter at gazeindlægget er fjernet, og dyrene følges i de efterfølgende 14 dage for tegn på lokale og systemiske virkninger.

I langvarige undersøgelser med gentagen indgift i perioder af 3 måneders varighed inddeles unge albino-kaniner af begge køn tilfældigt i tre grupper med tre til seks dyr i hver gruppe plus et lige stort antal kontroldyr. Det eksponerede område på huden hos mindst to dyr i hver gruppe er afskrevet. Testmaterialet påføres direkte på huden 5 dage om ugen i i alt 60 påføringer. Hele stammen af hvert dyr omvikles som i den foregående test, og omviklingen fastgøres med tape. Der anbringes halsbånd på dyrene for at forhindre indtagelse af testmaterialet. Der foretages med mellemrum under forsøget en vurdering af de observerede topiske virkninger, og dyrene observeres for systemiske virkninger. Ved afslutningen af eksponeringssekvensen aflives dyrene, og der foretages en fuldstændig nekropsi. Histologiske sektioner af det hudeksponerede område samt af alle unormale væv vurderes.

Undersøgelsen af mulige kræftfremkaldende virkninger af gentagen lokal indgift af kemiske agenser omfatter undersøgelser af varierende varighed fra 3 måneder til 2 års varighed. De dyr, der almindeligvis anvendes, er hvide mus, og forsøget omfatter både positive og negative kontrolgrupper af dyr samt mindst to forsøgsgrupper, der tildeles høje og lave doseringskoncentrationer af midlet. Antallet af dyr i hver gruppe er mellem 25 og 50 hanner plus et lige så stort antal hunner, som alle er opstaldet individuelt. Huden på hvert dyr barberes på bagsiden af nakkefoden og mellem skulderbladene. Midlet males eller dryppes fra en pipette på den blottede hud. Ved hver påføring er mængden af påført materiale 0,1 ml, og dyrene behandles to gange ugentligt i hele forsøgsperioden. De dyr, der overlever forsøget, og de dyr, der bliver syge i løbet af forsøget, nekropseres. Der foretages en histopatologisk undersøgelse af alle væv som beskrevet i de konventionelle kroniske toksicitetsforsøg. Der lægges særlig vægt på at vurdere dyrene i løbet af forsøget med henblik på forekomst og art af hudtumorer hos dyrene. Disse forsøg ændres almindeligvis til at omfatte procedurer til påvisning af, om det undersøgte kemikalie virker ved at udløse eller fremme forekomsten af tumorer.