Albinokanin

Primär irritation – hud

De djur som har använts i stor utsträckning för att upptäcka irriterande egenskaper hos kemikalier är albinokanin, albino marsvin och vit mus. När en kemikalie appliceras genom upprepad dermal applicering är syftet med testet att upptäcka både topiska och systemiska effekter. När föreningar absorberas i betydande utsträckning från huden kan LD50-värdet bestämmas. När kaniner används kan testets varaktighet variera från minst 3 dagar, med applicering av medlet vid ett tillfälle, till så lång tid som 2 år. När studien är av den långvariga typen följs djuren på ett sätt som liknar de allmänna långvariga studier som tidigare beskrivits, dvs. djuren genomgår hematologiska, klinisk-kemiska och urintester. När karcinogena effekter ska utvärderas förlängs hudtesterna med en period på 2 år, under vilken medlet målas på huden minst två gånger i veckan under hela testet.

Det akuta hudtestet är vanligtvis ett 3-dagars test. Det utförs på ett begränsat antal albino-kaniner som har delats in i två lika stora grupper. Området över ryggen på varje djur som sträcker sig från nackbasen till bakbenen rakas eller epileras. I den ena gruppen slipas ett område på cirka 2 tum 2 av den nakna huden genom att göra mindre snitt genom ytskiktet av celler, dvs. snitten är inte tillräckligt djupa för att störa derma eller ge upphov till blödning. Om testmaterialet är en vätska placeras 0,5 ml eller mindre av materialet under en 1 × 1 tum stor gasbinda som fästs på plats över det rakade hudområdet hos både de nötta och icke nötta djuren. Om medlet är ett fast ämne löses det upp i ett lämpligt lösningsmedel, t.ex. vegetabilisk olja eller vatten, och 0,5 g av ämnet placeras under gasbindan. När ett lösningsmedel används ingår en kontrollgrupp av djur som endast utsätts för lösningsmedlet i testet. Djuren immobiliseras sedan i allmänhet i fixeringsstolar och hela bålen på varje djur lindas in i ett icke-absorberande bindemedel under de följande 24 timmarna. Efter 24 timmars tidsintervall avlägsnas bindemedlet och kompressen, och det område som utsatts för exponering utvärderas och utvärderas på nytt 48 timmar senare.

Utvärdering av hudeffekter innebär att man använder ett poängsystem för graden av rodnad och graden av ödem på den plats där gasbindan applicerats. Det poängsystem som används är vanligen det som har publicerats i Federal Register i avsnitt 191.11 i Federal Hazardous Substances Act of the United States. Poängsättningen innebär att man tilldelar separata siffror för graden av erytem och graden av ödembildning enligt följande: Ingen erytem, 0; lätt, knappt märkbar erytem, 1; väldefinierad erytem, 2; måttlig till allvarlig erytem, 3; och allvarlig, rödbetsröd erytem med skador på djupet, 4; inget ödem, 0; lätt, knappt märkbart ödem med upphöjda kanter, 2; måttligt ödem med ytan upphöjd med ungefär 1 mm, 3; allvarlig ödem med området upphöjt mer än tidigare och som sträcker sig bortom det område där exponeringen ägde rum, 4. De poäng som erhållits för både erytem och ödem vid varje poängsättningsperiod och för både den nötta och intakta huden listas och medelvärdet för varje grupp och för varje typ av effekt beräknas. Alla åtta medelvärden adderas sedan och divideras med 4 eftersom det finns fyra medelvärden för varje effekt (erytem och ödem), vilket ger en slutlig numerisk siffra som är den primära irritationspoängen. När systemisk toxicitet ska bestämmas utöver lokal toxicitet behandlas djuren vid ett tillfälle enligt ovan, förutom att exponeringsområdet tvättas efter det att gasbindan avlägsnats och djuren följs under de efterföljande 14 dagarna för att se om det finns tecken på lokala och systemiska effekter.

I långvariga, upprepade administreringsstudier under perioder av 3 månaders varaktighet delas unga albino-kaniner av båda könen slumpmässigt in i tre grupper med tre till sex djur i varje grupp plus ett lika stort antal kontrolldjur. Exponeringsområdet på huden hos minst två djur i varje grupp slipas. Testmaterialet appliceras direkt på huden 5 dagar/vecka under totalt 60 appliceringar. Hela bålen på varje djur lindas in på samma sätt som i det föregående testet och lindningen fästs med tejp. Djurens halsband placeras på djuren för att förhindra att de får i sig testmaterialet. Bedömning av de observerade topiska effekterna görs med jämna mellanrum under testet och djuren observeras med avseende på systemiska effekter. I slutet av exponeringssekvensen avlivas djuren och fullständig nekropsi utförs. Histologiska sektioner av det område där huden exponerats samt av alla onormala vävnader utvärderas.

Undersökningen av möjliga cancerframkallande effekter av upprepad topisk administrering av kemiska agenser inbegriper studier som varierar i varaktighet från 3 månader till 2 års varaktighet. De djur som vanligen används är vita möss, och testet omfattar både positiva och negativa kontrollgrupper av djur plus minst två testgrupper som tilldelas höga och låga doseringskoncentrationer av agenset. Antalet djur i varje grupp är mellan 25 och 50 hanar och lika många honor, som alla är individuellt inhysta. Huden på varje djur rakas på baksidan av nacken och mellan skulderbladen. Medlet målas eller droppas från en pipett på den exponerade huden. Vid varje applicering är volymen 0,1 ml, och djuren behandlas två gånger i veckan under hela försöket. De djur som överlever försöket och de som blir sjuka under försöket obduceras. Alla vävnader undersöks histopatologiskt på det sätt som beskrivs i konventionella tester av kronisk toxicitet. Särskild uppmärksamhet ägnas åt att utvärdera djuren under studiens gång för att se om de uppvisar hudtumörer och vilken typ av tumörer det rör sig om. Dessa tester modifieras vanligen för att inkludera förfaranden för att upptäcka om den kemikalie som testas verkar genom att initiera eller främja uppkomsten av tumörer.